微滴式数字PCR和实时荧光定量PCR对新型冠状病毒肺炎患者不同时间血便尿中核酸检测结果初步探讨

目的 分析微滴式数字PCR(droplet digital PCR, ddPCR)和实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)的核酸检测结果,比较两种方法检测各类样本的差异性,为改进新型冠状病毒核酸检测方案提供数据支持。 方法 利用ddPCR和qPCR技术对已经确诊的3例新型冠状病毒肺炎患者发病不同时间的全血、尿液、粪便共22份标本进行新型冠状病毒核酸检测。 结果 两种方法对人保守区域基因扩增结果一致:全血标本信号最强,尿液次之,粪便最少;ddPCR在1份全血,1份尿液,5份粪便中检出ORF-1ab和N基因的阳性微滴,qPCR仅在3份粪便中检出上述基因,漏检的3个标本基因拷贝数平均浓度为128 copies/ml;ddPCR在发病<5、5~15、>15 d的各类标本中都有检出,qPCR检出以中晚期为主;重症病例用ddPCR均可测到阳性微滴,qPCR检测的各类标本均为阴性;轻症病例的各类标本中qPCR只有粪便核酸检测阳性,ddPCR检出率高于qPCR。 结论 ddPCR可以有效克服qPCR 灵敏度不足的难题,是对qPCR 的有益补充,尤其是针对病毒载量比较低的血液、尿液和可疑的粪便或肛拭子标本,适用于早期感染的判断及患者治愈后出院诊断。     

Immune responses against hepatitis C virus genotype 3a virus-like particles in mice: A novel VLP prime-adenovirus boost strategy

Chronic hepatitis C virus (HCV) infection represents a major health threat to global population. In India, approximately 15–20% of cases of chronic liver diseases are caused by HCV infection. Although, new drug treatments hold great promise for HCV eradication in infected individuals, the treatments are highly expensive. A vaccine for preventing or treating HCV infection would be of great value, particularly in developing countries. Several preclinical trials of virus-like particle (VLP) based vaccine strategies are in progress throughout the world. Previously, using baculovirus based system, we have reported the production of hepatitis C virus-like particles (HCV-LPs) encoding structural proteins for genotype 3a, which is prevalent in India. In the present study, we have generated HCV-LPs using adenovirus based system and tried different immunization strategies by using combinations of both kinds of HCV-LPs with other genotype 3a-based immunogens. HCV-LPs and peptides based ELISAs were used to evaluate antibody responses generated by these combinations. Cell-mediated immune responses were measured by using T-cell proliferation assay and intracellular cytokine staining. We observed that administration of recombinant adenoviruses expressing HCV structural proteins as final booster enhances both antibody as well as T-cell responses. Additionally, reduction of binding of VLP and JFH1 virus to human hepatocellular carcinoma cells demonstrated the presence of neutralizing antibodies in immunized sera. Taken together, our results suggest that the combined regimen of VLP followed by recombinant adenovirus could more effectively inhibit HCV infection, endorsing the novel vaccine strategy.     

健康成年人接种两剂新型冠状病毒灭活疫苗后序贯加强免疫重组新型冠状病毒疫苗(CHO细胞)的免疫原性和安全性研究

目的 评价在接种两剂已上市新冠病毒灭活疫苗的人群中序贯加强免疫重组新型冠状病毒疫苗(CHO细胞)后的免疫原性和安全性,为制定新型冠状病毒疫苗的加强免疫策略提供科学依据。 方法 采用开放性试验设计,筛选入组360例已接种两剂新冠病毒灭活疫苗3～4个月、6～8个月、11～13个月的18周岁及以上研究对象并接种1剂重组新型冠状病毒疫苗(CHO细胞)。采集所有研究对象研究用疫苗接种前、接种后14 d血样,用于体液免疫检测,收集研究用疫苗接种后1个月内的所有不良事件。 结果 本研究入组360例研究对象,按研究对象加强免疫与基础免疫间隔时间分3组(A组91～120 d,B组181～240 d,C组331～390 d),各组120例,无研究对象脱落。三组年龄均值分别为38.13、40.22和45.73岁,各组间年龄差异有统计学意义(F=13.516,P＜0.001),A、B组差异无统计学意义(P=0.168),C组和A、B组间差异均有统计学意义(P＜0.001)。三组 IgG GMC(几何平均浓度)免疫前分别为4.81、4.23、2.12 AU/ml,差异有统计学意义(F=10.054,P＜0.001),C组和A、B组间差异均有统计学意义(P＜0.001),A、B组间差异无统计学意义(P=0.520);三组免疫后 IgG GMC 分别为106.69、124.05、80.04 AU/ml,差异无统计学意义(F=2.028,P=0.133)。三组 IgG 抗体阳转率分别为84.17%、87.50%、79.17%,差异无统计学意义(χ²=3.081,P=0.214)。免疫前血清针对Delta变异株和原型株不同组别的中和抗体滴度比较,三组原型株中和抗体GMT(几何平均滴度)为1∶2.18、1∶2.18、1∶2.19,差异无统计学意义(F=0.011,P=0.990);三组Delta变异株中和抗体GMT为1∶2.09、1∶2.17、1∶2.16,差异无统计学意义(F=0.378,P=0.686)。免疫后血清三组原型株中和抗体 GMT为1∶31.09、1∶34.90、1∶21.98,差异无统计学意义(F=2.262,P=0.106);三组Delta变异株中和抗体GMT为1∶61.46、1∶77.44、1∶43.71,差异无统计学意义(F=2.105,P=0.123)。序贯加强免疫后血清对新型冠状病毒Delta变异株和原型株的中和抗体阳转率分别达到82.78%、83.33%。三组 SARS-CoV-2原型株中和抗体阳转率分别为86.67%、87.50%、75.83%,差异有统计学意义(χ²=7.320,P=0.026),其中C组低于A组和B组;三组 SARS-CoV-2 Delta变异株中和抗体阳转率分别为87.50%、84.17%、76.67%,差异无统计学意义(χ²=5.183,P=0.075)。发生不良事件人数为124人,不良事件总体发生率为34.44%。各组发生率分别为35.83%、40.83%和26.67%,差异无统计学意义(χ²=5.487,P=0.064),所有研究对象出现的不良事件以接种部位不良事件为主,主要表现为疫苗接种部位疼痛(23.89%);全身不良事件主要表现为疲劳/乏力(6.94%),未发生与疫苗接种有关的SAEs。结论 接种两剂新型冠状病毒灭活疫苗后序贯加强免疫重组新型冠状病毒疫苗(CHO细胞)具有良好的免疫原性和安全性。较长间隔期的免疫前IgG和免疫后原型株中和抗体阳转率较低,不同间隔期的免疫后IgG 、Delta变异株和原型株中和抗体水平比较差异均无统计学意义,建议基础免疫后6~8个月为最佳的接种间隔。     

浏阳市居民新鲜水果摄入频率与脑卒中发病的关联

目的 了解湖南省浏阳市居民新鲜水果摄入频率情况,探讨新鲜水果摄入频率与脑卒中发病关联。 方法 利用中国慢性病前瞻性研究湖南省浏阳市项目点30～79岁常住居民基线调查数据和随访获得的脑卒中发病数据,利用Cox比例风险模型,在调整混杂因素后,评估新鲜水果摄入频率与脑卒中发病的关联。 结果 共57 288名研究对象纳入分析,浏阳市仅7.38%的研究对象每周有4 d及以上吃新鲜水果 。男性、家庭年收入水平低、文化程度低、吸烟、饮酒人群新鲜水果摄入频率较低(P<0.001)。2015—2019年共随访观察到2 720例脑卒中发病。增加新鲜水果摄入频率对脑卒中的发病有保护作用,与不吃或极少吃新鲜水果相比,每周有4 d及以上吃新鲜水果脑卒中的发病风险降低了28%(HR=0.72,95%CI:0.61~0.85),缺血性脑卒中的发病风险降低了25%(HR=0.75,95%CI:0.60~0.94),出血性脑卒中的发病风险降低了51%(HR=0.49,95%CI:0.35~0.76)。 结论 新鲜水果摄入频率增加能降低脑卒中发病风险。浏阳市居民新鲜水果摄入频率情况不容乐观,针对这一问题,需要采取适当措施以增加居民新鲜水果摄入频率。     

湖南部分地区40岁及以上居民烹饪污染性燃料及生物燃料暴露情况分析

目的了解湖南部分地区40岁及以上居民烹饪污染性燃料及生物燃料暴露情况,为污染性燃料和生物燃料暴露防控工作提供参考依据。方法调查对象来自于2019年湖南省5个慢性阻塞性肺疾病监测点,采用多阶段分层整群随机抽样方法,面对面询问调查方式收集相关信息。对样本复杂加权后分析不同特征人群烹饪污染性燃料和生物燃料暴露情况。结果实际纳入分析的有效样本为2981人。经复杂加权后,湖南省40岁及以上人群烹饪污染性燃料暴露率为19.69%(95%CI:18.11%~21.27%),烹饪生物燃料暴露率为16.14%(95%CI:14.66%~17.62%),烹饪污染性燃料暴露率和烹饪生物燃料暴露率均表现为女性高于男性(P<0.05),农村高于城镇(P<0.05),随年龄减小和文化程度升高而降低(均P<0.05)。结论湖南部分地区40岁及以上居民烹饪污染性燃料/生物燃料使用还是较为普遍,重点应针对农村地区女性采取适当措施以降低暴露水平。     

2016—2018年湖南省含乳冷冻饮品生产加工过程肠杆菌科和单核细胞增生李斯特菌监测

目的 了解含乳冷冻饮品生产加工过程中肠杆菌科和单核细胞增生李斯特菌(简称单增李斯特菌)的分布,分析其污染的来源。方法 对湖南省4家含乳冷冻饮品生产企业生产加工过程各个环节的样品进行监测,采用国家标准检测方法对肠杆菌科和单增李斯特菌进行检验,利用脉冲场凝胶电泳(pulse field gel electrophoresis,PFGE)技术对分离的单增李斯特菌进行分子分型。结果 2016—2018年4家企业共监测1 132份样品。2018年66份终产品样品中肠杆菌科定量检测有超标现象(计数结果>100 CFU/g的样品有3份),同时检出2株单增李斯特菌。非食品样品中肠杆菌科检出率最高是工具类样品(48.0%)(χ²=28.440,P＜0.001),单增李斯特菌检出率最高是环境类样品(18.7%)(χ²=41.193,P＜0.001)。分离的102株单增李斯特菌共有11种PFGE带型,其中有6组分离株分别具有同源性。终产品中单增李斯特菌的污染主要来自环境定植菌株。结论 该研究对掌握含乳冷冻饮品生产加工过程肠杆菌科和单增李斯特菌的污染分布及终产品中单增李斯特菌的可能污染源有重要意义,提示企业应加强生产监管,完善生产加工过程中的卫生控制措施,防止潜在风险以保障冷冻饮品终产品的食用安全。     

2015—2020年湖南省感染性腹泻病原学及分子流行病学特征分析

目的 了解湖南省感染性腹泻的病原谱,追踪其分子流行病学演变趋势,为感染性腹泻的综合防治提供科学依据。 方法 通过哨点监测结合暴发疫情监测的方法,收集2015—2020年湖南省感染性腹泻标本,对细菌病原采用细菌培养、生化鉴定进行检测;对病毒病原采用分子生物学方法进行分型鉴定,并对部分PCR阳性标本进行序列测定。 结果 哨点医院主动监测的总阳性率为35.61%,病毒检出率20.26%高于细菌检出率11.26%,混合病原感染检出率为4.09%。细菌病原谱以沙门菌O∶4群鼠伤寒型为主,病毒病原谱以轮状病毒A组G9P[8]型和诺如病毒GⅡ.4Sydney[P31]型感染为主。不同监测、不同年份的病原谱构成及其基因型变迁规律各不相同:哨点医院监测细菌阳性率低而病毒阳性率高时,诺如暴发疫情随之增加;暴发疫情中诺如病毒感染为86.78%,其中69.43%为GⅡ型感染,12.42%为GⅠ型感染,混合感染占3.03%。诺如病毒暴发疫情具有明显季节性,优势基因型为GⅡ.2[P16]占42.97%。 结论 2015—2020年湖南省感染性腹泻病毒类病原体高于细菌类,鼠伤寒沙门菌、A组轮状病毒G9P[8]和诺如病毒GⅡ.4 Sydney [P31]是最主要的病原体和优势血清/基因型;GⅡ.2 [P16]是诺如病毒暴发流行的优势基因型;通过连续哨点监测的数据支持,提前为暴发疫情做好了防控,促成了湖南省感染性腹泻发病率的平稳下降。     

湖南省2019年碘缺乏病监测结果分析

目的 分析2019年碘缺乏病监测结果,掌握干预措施实施效果,为适时采取针对性防治措施和科学调整干预策略提供依据。 方法 2019年4—5月全省122个县(市、区,简称县)按东、西、南、北、中划分5个抽样片区,在每个片区各随机抽取1个乡(镇、街道,简称乡);每个乡各抽取1所小学校,每所小学抽取8～10岁儿童40名,采集尿样和儿童家中食用盐样,检测尿碘和盐碘含量,采用B超法测量儿童甲状腺容积。每个县在所抽取的5个乡中各随机抽取20名孕妇,采集孕妇随机尿样和家中食用盐,检测尿碘含量和盐碘含量。 结果 共收集36 667份盐样进行定量检测,盐碘均数(26.32±5.69)mg/kg,变异系数21.61%,碘盐覆盖率为99.68%,合格碘盐食用率为95.24%。共检测儿童尿样24 450份,儿童尿碘中位数为231.1 μg/L,共检测孕妇尿样12 204份,孕妇尿碘中位数为186.5 μg/L,共检测8 224名8～10岁儿童甲状腺容积,甲状腺肿大率为0.79%。 结论 监测重点人群碘营养状况处于适宜水平,湖南省处于持续消除碘缺乏病状态。以食盐加碘防治碘缺乏病的干预措施成效显著,应继续针对重点人群加强健康宣教,号召因地制宜,科学补碘和按需补碘。     

Evaluation of effectiveness,safety and cost-benefit of the 23– valent pneumococcal capsular polysaccharide vaccine for HIV-Infected patients

IntroductionDue to the lack of understanding of the protective effects and safety of 23-valent pneumococcal polysaccharide vaccine (PPV23) in immune-deficient populations, the vaccination rate of PPV23 among HIV-infected patients is still very low in China. The main objectives of this study were to determine whether the efforts to assess measures for the prevention of pneumococcal pneumonia are still worthwhile, and provide designated vaccination program of HIV-infected persons for government policy based on.Methods60 HIV-infected adults in Lanshan county who had never been vaccinated with any pneumococcal vaccine were enrolled in this study, voluntary vaccination of PPV23 and One-year follow-up after vaccination can be completed.Result76.67% patients (46/60) had serologic response at 12 months after vaccine, CD4 count(≤500 cells/ul or > 500 cells/ul) and Month from diagnosis to first antiviral therapy (≤1 month or > 1 month) were related to antibody responses (p < 0.05).In this study, PPV23 was well tolerated, no adverse reaction was reported.11 Streptococcus pneumoniae pneumonia (9.17%,11/120) occurred in the Unvaccinated group and 1 case(1.67%,1/60)in the vaccination group within one year after vaccination(Fisher's exact probability, P = 0.225). The VE was 81.79%. The per capita benefit was 39.32 dollars, the benefit-cost ratio = 1.19. There are significant statistical differences between the vaccinated group and the non-vaccinated group in outpatient costs (p < 0.05, 95 %CI: 9.29–32.11), Medicine costs (p = 0.017, 95 %CI: 2.47–24.44), and disease related indirect costs (p = 0.038, 95 %CI: 0.93–33.63) within one year of vaccination.ConclusionOur study results showed that PPV23 can be safely and effectively administered to HIV-1 infected individuals and effectively preventing Streptococcal pneumonia. Considering the cost-benefit of vaccination among HIV-infected persons, as it has been reported in our study, it is necessary to promote the widespread use of the vaccine among HIV-infected persons in the future.     

甘泰康对大鼠免疫性肝纤维化影响的研究

目的　探讨甘泰康对大鼠免疫性肝纤维化的影响。方法　采用猪血清腹腔注射 ( 0 5ml/鼠 )建立大鼠免疫性肝纤维化模型 ,干预组造模同时给予甘泰康 ( 0 2 7g/kg·bw)灌胃 ,7周后采血 ,测定血清透明质酸 (HA)、层粘连蛋白 (LN)、III型前胶原 (PCIII)含量 ;取肝组织 ,常规切片 ,Masson、James染色后光镜下观察肝组织病理改变 ,病理图像系统半定量分析胶原纤维、网状纤维的增生情况。结果　甘泰康可有效对抗猪血清所致大鼠血清HA、LN、PCIII含量升高 ,有效对抗猪血清所致大鼠肝组织内胶原纤维、网状纤维增生。结论　甘泰康对猪血清诱导的大鼠免疫性肝纤维化有一定的防治作用。